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Detección de cepas de Escherichia coli Shiga Toxigénica (STEC) y enteropatógena (EPEC) basada en PCR multiplex

Abstract:

Escherichia coli (STEC) y (EPEC) causan enfermedades gastrointestinales y pertenecen a los serogrupos 0111, 0157 y otros, frente a lo cual se planteó como objetivo implementar la técnica de PCR múltiplex para diagnosticar y caracterizar sus genes de virulencia. Se desarrollaron tres PCR multiplex: en la primera fueron empleados tres pares de iniciadores específicos de  la  región   rfbE (codificante  del  antígeno  O) del serotipo 0157:H7, del gen eaeA que  codifica  la proteína intimina y del gen hIyA codificante de  hemolisina, los cuales generaron productos de 259, 384 y 534 pb. En la segunda PCR se detectaron los genes de la sub-unidad A de las shigatoxinas stx1, stx2, incluidas las variantes de stx2. con amplicones de 180 y 255 pb. En la tercera se utilizaron iniciadores para stx1, stx2, eaeA y hIyA. Se determinó la selectividad de los iniciadores con cepas STEC, ATCC y se detectó hasta 1 UFC, lo cual demuestra su alta sensibilidad.  Palabras clave: Serogrupos, virulencia, iniciadores, intimina, hemolisina.