Desarrollo, estandarización y aplicación de la técnica molecular PCR en tiempo real para la detección y cuantificación de ADN del trematodo Amphimerus spp en metacercarias …

Abstract:

La Organización Mundial de la Salud (OMS) considera a las trematodiasis como enfermedades tropicales olvidadas. En el Ecuador existen 3 trematodiasis que son prevalentes persistentes en zonas tropicales, paragonimiasis, fasciolasis y amphimeriasis. La amphimeriasis que fue recientemente y por primera vez descrita en Ecuador, es considerada una enfermedad emergente, infectando personas, gatos y perros en las provincias de Esmeraldas y Manabí. Amphimerus spp. se localiza aloja en las vías biliares de los infectados causando enfermedad. El ciclo de vida de Amphimerus requiere de 2 hospederos intermediarios; los primeros son invertebrados (caracoles de río) mientras que los segundos son varias especies de peces de agua dulce. La infección se produce por la ingestión de peces crudos o mal cocidos infectados con metacercarias del parásito. La identificación de las metacercarias en los peces se realiza por disección, digestión artificial y observación microscópica; sin embargo, la sensibilidad, especificidad y eficiencia se ven afectadas por esta técnica laboriosa. Por esta razón, se requiere del desarrollo de técnicas moleculares como la PCR en tiempo real (qPCR) para la identificación rápida y específica de ADN del Amphimerus en diferentes especies de peces en las zonas endémicas. En esta investigación se estandarizó una PCR en Tiempo Real usando cebadores diseñados in house dirigidas a la región ITS2 de Amphimerus, se estandarizó por medio de gradientes de temperatura de hibridación y denaturación; y variaciones en la concentración de cebadores. En el ciclo de umbral (Ct) resultante de cada variación …

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