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Determinación de la interacción de una celulasa recombinante con la expansina PcExl1 de Pectobacterium carotovorum

Abstract:

La pared celular de las plantas está conformada por varios polisacáridos, entre ellos la celulosa, hemicelulosa, y la pectina. La celulosa a su vez, posee regiones cristalinas y amorfas, que son hidrolizadas por la acción de enzimas nombradas como celulasas, endoglucanasas y exoglucanasas. La bacteria Pectobacterim carotovorum es notoria por su maceración a la pared celular de las plantas causando la pudrición blanda. La capacidad de destruir las plantas se debe a la expresión y secreción de una amplia gama de enzimas hidrolíticas debido a la acción del sistema de inducción de las bacterias Gram-negativas, el cual incluyen celulasas y expansinas. P. carotovorum PC1 FJ890936 se utilizó para el diseño de los cebadores para la amplificación del gen de la celulasa y que incluyera el sitio de exportación celular pelB. El producto de la PCR se clonó en el vector de expresión pET22b-PcExl1 y se transformaron en Escherichia coli. El peso molecular de cada una de las clonas obtenidas fue de 1267 pb. La estimación de los pesos moleculares de la proteína expresada se realizó usando análisis de SDS-PAGE y se obtuvieron dos bandas de 39 kDa y 32 kDa, respectivamente. La actividad enzimática se llevó a cabo por un ensayo de reducción de liberación de azúcares reductores. Sin embargo, la celulasa no mostró una posible interacción con la expansina PcExl1. Palabras clave: pared celular, celulasas, expansina, Pectobacterium carotovorum.