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Aislamiento y caracterización microbiológica, bioquímica y molecular de Agrobacterium tumefaciens a partir de tejidos vegetales infectados

Abstract:

Se trató de obtener cepas salvajes de Agrobacterium tumefaciens patógeno causante de la enfermedad de la agalla de la corona, mediante el aislamiento a partir de tumores de rosas y caracterización por medio de técnicas bioquímicas y moleculares, estableciendo su taxonomía a fin de incorporarlas al cepario de controles positivos del Laboratorio de Identificación Molecular (IDgen). El aislamiento se llevó a cabo en dos etapas empleando muestras de rosas proporcionadas por IDgen: la primera consistió en macerar las muestras e inocularlas directamente en placas con dos tipos de medios semiselectivos, mientras que para la segunda se usó únicamente medio D1 con una etapa previa de enriquecimiento selectivo. Las placas se incubaron a 28 C durante 3-7 días, y sus aislados se caracterizaron de acuerdo con la morfología macroscópica y tinción Gram; las cepas que correspondieron a bacilos Gram negativos se sometieron a las pruebas bioquímicas de producción de catalasa, oxidasa, sulfuro, motilidad a 28 y 35 C, aclaramiento ácido, telurito de potasio y 3-cetolactosa. Posteriormente, se realizó una reacción en cadena de la polimerasa con primers específicos para las regiones virD2, ipt y ARNr 23S. De un total de 21 cepas que fueron caracterizadas morfológicamente, 17 resultaron ser bacilos Gram negativos y, tras la caracterización bioquímica, ninguna cepa fue capaz de producir 3-cetolactosa; 9 se sometieron a caracterización molecular, de las cuales solo una (PAT07) presento un amplicón de aproximadamente 750pb con primers virD2 e ipt, esta se amplificó y secuenció con primers universales para el ARNr 16S …