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Estandarización de la prueba del anticuerpo neutralizante unido a una peroxidasa (NPLA) para la detección de anticuerpos contra el virus de Peste Porcina Clásica.

Abstract:

El NPLA permite evaluar la capacidad de los anticuerpos presentes en un suero para neutralizar la infección del virus in vitro, esta técnica mediante anticuerpos monoclonales permite identificar entre animales enfermos y vacunados. Para la estandarización del ensayo primero se determinó el crecimiento de la línea celular de riñón de cerdo (PK-15) y su viabilidad celular con distintas densidades celulares y tiempos de incubación, estableciendo una densidad inicial de 12x103 células/pocillo para todos los ensayos y realizando una lectura a las de 72 h post-infección del virus de PPC. Mediante inmunoperoxidasa directa se evaluó la replicación viral en la línea celular y la cuantificación de los títulos virales infectivos (DICT50/ mL) replicando el virus semilla (cepa Alfort 187) en la línea celular PK-15 logrando después de 4 subcultivos sucesivos un título infectivo de 108.26 DICT50 /mL. Los títulos de anticuerpos neutralizantes mediante NPLA de las muestras de suero fueron altos entre 1.8 y 7.85 (log10). En sensibilidad analítica los sueros con títulos de 7.8 (log10) son capaces de neutralizar el virus hasta una dilución 1:1280. El ensayo de NPLA demostró una alta especificidad al no neutralizar sueros exclusivos ni inclusivos del género Pestivirus.