IMPLEMENTACIÓN DE UN ENSAYO PCR MULTIPLEX PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LAS ENTEROVARIEDADES DE Escherichia coli PATÓGENAS

Abstract:

Enteroagregativa (ECEA), E. coli Enterohemorrágica (ECEH) y E. coli difusa adherente (ECDA). El objetivo de esta tesis fue implementar un ensayo PCR multiplex para identificar cada Escherichia coli patógena, mediante un diseño de tipo exploratorio y confirmatorio. Primero, se obtuvo las cepas control positivo y se aisló el ADN de cada una con un kit comercial, con el fin de optimizar las temperaturas de hibridación, evaluar la concentración final de cada primer y los tiempos del termociclador, para amplificar los genes vt1, vt2, eae, estA, eltB, aggR, ipaH y Da. La PCR multiplex fue dividida en dos, la primera amplificó las enterovariedades ECEH, ECEP y ECDA y la segunda ECET, ECEI y ECEA. Se realizó el límite de detección medido en concentración de ADN, tomando como patógenos de referencia a ECEH para la primera PCR multiplex y ECET para la segunda, con un límite de detección de 0, 0029 ng/µL y 0,011 ng/µL respectivamente. La técnica propuesta presentó una alta eficiencia, sensibilidad y especificidad en los controles positivos, otras cepas y muestras de heces, en un ensayo de campo limitado.

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