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Identificación molecular del complejo Burkholderia cepacia, bacteria productora de antibióticos, mediante PCR en tiempo real.

Abstract:

La presente investigación tuvo como objetivo principal identificar molecularmente bacterias productoras de antibióticos del Complejo Burkholderia cepacia; identificadas bioquímicamente como Burkholderia cepacia por Egas y Tinajero (2016), con un porcentaje de probabilidad 88,79% y 99,51% para BC1 y BC2 respectivamente. Para alcanzar el objetivo, se analizaron estadísticamente los métodos de extracción y purificación de ADN: Kit-Roche, Ebullición y PCI, la prueba ANOVA y Tukey determinó una diferencia significativa (p˂0,001) entre los métodos implementados, la metodología Kit-Roche presentó los mejores resultados de calidad y concentración 8,80E+03 y 3,61E+03 (ng/mL) de ADN para BC1 y BC2; sin embargo el método por Ebullición se muestra como una alternativa de bajo costo al presentar pureza y una concentración de 2,40E+03 y 2,41E+03 (ng/mL) de ADN para BC1 y BC2, características de calidad aceptables para la técnica PCR en tiempo real. Para la identificación molecular, se amplificaron las regiones 16S rARN-CBc, Burkholderia sp. (recA) y B. cepacia-genomovar I (recA) empleando primers específicos, el análisis de las curvas de amplificación obtenidas mediante PCR en tiempo real confirmaron que BC1 pertenece a la especie Burkholderia cepacia (genomovar I), especie que conforma el Complejo Burkholderia cepacia; a su vez, se confirmó que BC2 pertenece al: género Burkholderia, pero no se corroboró el genomovar del organismo; sin embargo se asevera que la cepa pertenece algún genomovar del CBc basándonos en la amplificación de la región 16S para CBc y su identificación bioquímica.