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Implementación y evaluación del ensayo amplificación isotérmica mediada por un lazo (lamp)para detección de brucella abortus en muestras biológicas de bovinos

Abstract:

Brucelosis bovina es un enfermedad infecto-transmisible provocada por Brucella abortus que se caracteriza por afectar principalmente al tracto reproductivo de hembras adultas. Esta enfermedad causa grandes impactos en el sector económico y representa una gran problemática en la salud pública. En el presente trabajo se planteó implementar un ensayo LAMP empleando material genético de las cepas vacunales de B. abortus RB51 y S19 inoculado y extraído de muestras de leche (1 X 106 – 1 X 100 UFC/ml leche) y tejidos de nódulos linfáticos (10 X 106 – 10 X 100 UFC/g tejido) de bovinos, posteriormente evaluar la sensibilidad analítica recurriendo a diferentes métodos de detección. Lográndose obtener ADN de B. abortus susceptible de ser amplificado en las muestras de leche, estableciendo un nivel de sensibilidad analítica mediante electroforesis en gel de agarosa-TAE teñido con Bromuro de etidio de 10 UFC/ml de leche, y la misma sensibilidad mediante el uso de SYBR green para la detección de fluorescencia, con éste colorante bajo luz natural se observó un cambio de color del naranja al verde así como un aumento de fluorescencia en las muestras positivas. En lo que respecta a tejidos inoculados con las cepas vacunales se observó gran variabilidad en la amplificación del ADN total por lo que no se obtuvo un ensayo confiable al aplicar el método LAMP para la detección de B. abortus presumiéndose la presencia de inhibidores de origen endógeno en los tejidos de nódulos linfáticos.