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Sensibilidad analítica de un ensayo de PCR múltiple para la identificación de cepas de campo o vacunales de brucella abortus en leche y nódulos linfáticos de bovinos

Abstract:

La brucelosis bovina es una enfermedad infecto-transmisible causada principalmente por Brucella abortus, tiene una distribución mundial y un efecto socioeconómico negativo debido a pérdidas ocasionadas por abortos, nacimiento de terneros débiles, reducción en la producción de leche e infertilidad en bovinos infectados, e impacto en salud pública por su carácter zoonótico. Para el diagnostico existen diferentes métodos laboratoriales, los indirectos como la aglutinación con antígeno teñido con Rosa de Bengala, la prueba de anillo en leche, ELISAs, entre otros, y los directos como el aislamiento bacteriano, Inmunofluorescencia directa y PCR. En el proceso de implementación de un ensayo diagnóstico en un laboratorio es necesario evaluar y estimar su idoneidad para su utilización concreta. Se evalúan una serie de variables, entre ellas la cantidad mínima de análito que se logra detectar por el ensayo, éste valor se conoce como sensibilidad analítica. El caso del PCR no es la excepción, por lo que el presente proyecto se planteó estimar la sensibilidad analítica del ensayo de PCR múltiple para su empleo en la identificación de cepas de campo de Brucella abortus y/o las cepas vacunales S19 y RB51 en muestras de leche y tejidos de nódulos linfáticos de bovinos. Como resultado se encontró que, en leche, la cepa S19 se amplifico un producto de 456 pb y cepa RB51 se amplifico un producto de 1290 pb y el límite de detección en las dos cepas fue de 1 X 104 UFC/ml. En el caso de los tejidos no se logró estimar la sensibilidad analítica, dado la incapacidad del método de extracción para obtener material genético de calidad para ser empleado en los ensayos de PCR y por otro lado, la inespecificidad mostrada por los primers empleados. Por lo que se deberá modificar el método de extracción de ADN total y usar otros primers o bkp_rediseñarlos.