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“Implementación y evaluación de un ensayo de PCR para la detección del agente causal de la quitridiomicosis”

Abstract:

La quitridiomicosis es una enfermedad emergente que ha causado la disminución a nivel mundial de al menos 500 especies de anfibios. Desde la descripción de su agente causal, Batrachochytrium dendrobatidis, se han desarrollado varias técnicas de diagnóstico, entre ellas la más utilizada la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En Ecuador, son pocas las instituciones que realizan el diagnóstico confiable de este patógeno. En el presente trabajo se desarrolló una prueba de PCR convencional múltiple, que detecta material genético del hongo y de anfibios. Se hicieron varios ensayos para comprobar el rendimiento de los cebadores universales de anfibios y del hongo a partir de muestras de ranas y establecer así un protocolo para el diagnóstico. El par de oligonucleótidos ANFFor/ANFRev fue usado para la amplificación de ADN de anfibios y Bd1a/Bd2a para el hongo. La amplificación de material genético de anfibios funcionó como un control de proceso, permitiéndonos saber si la muestra fue tomada adecuadamente y si la extracción de ADN, previo a la amplificación, fue la apropiada. El ensayo para el diagnóstico se realizó en 85 muestras de ranas de cinco localidades del Azuay. Se evaluó la sensibilidad y especificidad diagnósticas del ensayo, comparando los resultados con los obtenidos bajo la prueba de PCR en tiempo real, en la que se utilizó los cebadores ITS1-3Bd/5.8SBd. Se obtuvo un 14,29 % de sensibilidad y un 95% de especificidad. La prevalencia de la enfermedad fue obtenida según los resultados de la PCR en tiempo real y fue del 25,93 %.