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Validación de la determinación de los ácidos fenólicos presente en la infusión de cascarilla de la semilla de cacao (Theobroma cacao) por el equipo de electroforesis capilar

Abstract:

La cascarilla de cacao representa una fuente de polifenoles. Sin embargo, estos compuestos activos no son aprovechados para darle valor agregado a este residuo que se genera en grandes cantidades del proceso de manufactura del cacao. Este trabajo permite desarrollar un método alternativo para la identificación de ácidos fenólicos presentes en una infusión elaborada a partir de la cascarilla de la semilla de cacao (Theobroma cacao L.), el cual fue validado para garantizar la veracidad de los resultados obtenidos. El método se desarrolló empleando el equipo de electroforesis capilar, se utilizó un capilar de sílice fundida de 50 μm de diámetro interno y 30 cm de longitud efectiva con trayectoria de luz extendida, se utilizó una solución buffer de borato de 50 mmol.L-1 (pH 10,17), y se aplicó un voltaje de + 30 kV con inyección hidrodinámica de 50 mbar durante 5 s y la detección se realizó a una longitud de onda de 210 nm. El método fue validado de acuerdo a las pautas establecidas por el Consejo Internacional de Armonización de los Requisitos Técnicos para el Registro de Productos Farmacéuticos de Uso Humano (ICH). La infusión se elaboró de acuerdo a los procedimientos descritos por el Comité Europeo del Té (ETC) y la Asociación Europea de Infusiones de Hierbas (EHIA). Además, se evaluó el contenido de polifenoles totales por el método de Folin Ciocalteu, flavonoides por el método del tricloruro de aluminio, la actividad antioxidante se determinó mediante el porcentaje de inhibición de DPPH y el potencial antioxidante de reducción de hierro (FRAP). Las infusiones fueron sometidas a un proceso de derivatización (BSTFA+TMCS, 99:1) para la identificación de compuestos mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas, se manejó con columna capilar de 30 m x 0,25 mm y dimetilpolisiloxano de fenilo como fase estacionaria, la temperatura del horno de 60-275°C, con inyectores de splitless y gas helio con flujo constante. En la validación, se obtuvieron resultados satisfactorios en el rango de 10 - 80 mg.L-1 para el ácido gálico, el ácido siringico y el ácido caféico, mientras que el ácido benzoico presentó un rango satisfactorio de 6 – 48 mg.L-1 y el ácido clorogénico de 8 – 64 mg.L-1 . El método fue lineal (R2 > 0,98, prueba de falta de ajuste p > 0,05).Los parámetros de selectividad, precisión (CV < 7,81%) y la exactitud (>80%) fueron adecuados para el método con límites de detección y cuantificación de 0.04 a 0.19 mg.L-1 y 0.09 a 0.56 mg.L-1 , respectivamente. No se detectaron los ácidos fenólicos (gálico, siringico, benzoico, clorogénico y caféico) en la infusión de la cascarilla de la semilla del cacao. Sin embargo, ésta presentó un contenido de polifenoles totales de 47.65 mg EAG/g, flavonoides de 8.12 mg EQ/g, una concentración inhibitoria media del DPPH de 1126 mg.L-1 y un potencial antioxidante de 312,86 mg EAA/g. Este trabajo aporta con una nueva alternativa, que permite identificar de manera rápida y eficaz lo ácidos fenólicos que pueden estar presente en una infusión, lo cual proporciona a las industrias alimenticias dedicados a la elaboración de infusiones, que puedan introducir en las etiquetas de sus productos los parámetros como: el contenido de polifenoles, flavonoides, y ácidos fenólicos